色譜峰拖尾原因分析及處理方法

每個(gè)實(shí)驗(yàn)猿的實(shí)驗(yàn)生涯，總會(huì)遇到那么n次色譜峰拖尾。那么色譜峰為什么會(huì)拖尾呢？是柱子壞了？還是操作失誤？

說到色譜峰，估計(jì)任何一位色譜分析人員都希望自己實(shí)驗(yàn)做出來的峰型都是非常對(duì)稱、峰型尖銳并且達(dá)到分離度要求的。

衡量一個(gè)色譜峰的拖尾程度用拖尾因子（T）表示，計(jì)算公式為：

式中 W0.05h為5%峰高處的峰寬，d1為峰頂在5%峰高處橫坐標(biāo)平行線的投影點(diǎn)至峰前沿與此平行線交點(diǎn)的距離：

一般規(guī)定T應(yīng)為0.95~1.05。Tf＜0.95為前延峰，Tf＞1.05為拖尾峰。

說了一通拖尾因子的計(jì)算公式，那么產(chǎn)生拖尾峰有可能是什么原因呢？

下面一起看看常出現(xiàn)的情況：

液相色譜峰拖尾

1.部分色譜拖尾

一種情況是化學(xué)效應(yīng)，殘留硅羥基與待測(cè)物堿性基團(tuán)形成氫鍵。

那么這時(shí)候可以通過降低流動(dòng)相pH，或添加掃尾劑（TEA），消除二次化學(xué)作用，或者是采用封端的色譜柱。

若需要在高PH條件下使用，可選擇耐高pH的色譜柱。

（主流品牌再生色譜柱 ）

還有在大峰的尾部有小峰流出或者是干擾共洗脫峰，可以先調(diào)整色譜條件改善分離，若沒有改善也可以用DAD檢測(cè)峰的純度。

2.所有色譜拖尾

• 柱外效應(yīng)，色譜峰柱后擴(kuò)散

例如在色譜柱安裝時(shí)，需要注意連接螺母的匹配，柱床體積小的色譜柱需要使用更細(xì)的管線。

• 色譜柱污染

可以先排查是否流動(dòng)相及樣品容易引入的污染。

如果是金屬離子污染，可以通過酸洗（如甲醇和磷酸水沖洗），或者采用高純硅膠色譜柱；

若是有其它強(qiáng)保留雜質(zhì)吸附導(dǎo)致污染或者柱頭污染情況，可以考慮反沖或者再生色譜柱。

（主流品牌再生色譜柱 ）

• 樣品過載，或樣品溶劑不匹配

可以先降低進(jìn)樣量排查是否同樣出現(xiàn)拖尾情況。

另外保護(hù)柱失效了也會(huì)導(dǎo)致峰拖尾情況發(fā)生，這時(shí)候提醒各位需要更換保護(hù)柱啦~

以下情況匯總起來：

另外，樣品溶劑強(qiáng)度高于流動(dòng)相，柱外死體積過大， 樣品過載，進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子需要更換，儀器系統(tǒng)問題等，也會(huì)導(dǎo)致拖尾峰的出現(xiàn)。

色相氣譜峰拖尾

一般處理氣相色譜峰拖尾問題時(shí)總結(jié)成一句話就是：XXX樣品在XXX色譜柱拖尾啦，什么原因？

1.活性組分拖尾

極性或活性化合物容易被樣品流經(jīng)途徑中的活性位點(diǎn)吸附而呈現(xiàn)出拖尾，這類樣品分析要求系統(tǒng)具有良好的惰性。

一方面，需要保持系統(tǒng)（主要是進(jìn)樣口和色譜柱）的潔凈度，使用干凈的襯管和分流平板；對(duì)于嚴(yán)重污染的色譜柱，可以將進(jìn)樣口端截去（0.5~1）m，污染嚴(yán)重的話可以截去更多或用溶劑徹底清洗色譜柱（須是交聯(lián)鍵合固定相）。

另一方面，應(yīng)選用惰性更好的耗件，如去活的襯管（不用或慎用玻璃棉）和惰性好的低流失色譜柱。

正確的色譜柱安裝也很重要，如果是毛細(xì)管柱，色譜柱應(yīng)切割的平整光潔，殘留的毛邊或碎屑都會(huì)是潛在的活性位點(diǎn)，容易造成活性組分的吸附拖尾；注意色譜柱在FID/NPD噴嘴內(nèi)探伸的距離不宜過短，因?yàn)榛钚越M分有可能被噴嘴的金屬管壁吸附而拖尾。

（主流品牌低流失或超惰性色譜柱）

總之，根據(jù)相似相容原理，氣相色譜的流路儀器的各個(gè)部位會(huì)存在活性位點(diǎn)，從而容易吸附活性組分，導(dǎo)致色譜峰容易拖尾甚至不出峰。如若想要消除這方面影響，可以選擇去活的或者惰性良好的進(jìn)樣口配件和色譜柱，消除流路上的活性位點(diǎn)。

2.揮發(fā)性組分拖尾

早流出組分拖尾嚴(yán)重，多在不分流進(jìn)樣、柱上進(jìn)樣或樣品溶劑與色譜柱極性不匹配時(shí)出現(xiàn)，這主要是由于溶劑聚焦效應(yīng)不夠造成的。

改善峰形，可以采用保留間隙柱（連接于分析柱前的一段3~5米去活空管柱）、降低進(jìn)樣口溫度50°C、調(diào)整程序升溫初始溫度于溶劑沸點(diǎn)10~25°C之下。還應(yīng)確認(rèn)色譜柱安裝后沒有漏氣，系統(tǒng)各連接處沒有死體積。

3.低揮發(fā)組分拖尾

拖尾峰多是較晚流出的色譜峰，拖尾往往隨保留增加而加劇。除了檢查系統(tǒng)是否存在污染，應(yīng)注意消除冷凝點(diǎn)，適當(dāng)提高進(jìn)樣口和/或檢測(cè)器、色譜柱、傳輸管線等處的溫度。還有可能是系統(tǒng)的死體積造成的。檢查傳輸線接頭或熔融石英接頭，減少死體積。

4.所有組分都拖尾

主要原因包括：

進(jìn)樣口/色譜柱嚴(yán)重污染；

分流比過低；

色譜柱安裝不當(dāng)，（如在分流/不分流進(jìn)樣口，色譜柱探出密封墊圈的距離不應(yīng)超過4~6mm，探出過長(zhǎng)會(huì)阻礙樣品迅速有效地進(jìn)入色譜柱，因而導(dǎo)致峰拖尾。）毛細(xì)管柱伸入FID/NFD/FPD等噴嘴距離太短，也可能所有峰拖尾。

5.另外可能導(dǎo)致峰拖尾的原因

①不分流模式下，延遲時(shí)間過長(zhǎng)（通常應(yīng)在0.5~1.0分鐘之間）

②進(jìn)樣時(shí)注射器中有樣品殘留

③檢測(cè)器尾吹氣流量不足

④PLOT色譜柱過載

⑤組分共流出

⑥進(jìn)樣技術(shù)不佳

⑦某些含磷化合物在NPD白色銣珠上會(huì)顯示拖尾峰，建議更換為黑色銣珠

希望大家看到這里，以后遇到峰拖尾時(shí)能有一定的排查方向，若不能解決的，便及時(shí)與經(jīng)銷商或廠家溝通，配合排查。畢竟，許多色譜峰峰型問題都是復(fù)合型問題，并不一定是色譜柱的原因，遇到峰型異常需要耐心的一一排查，這樣才可解決問題。